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實時熒光定量PCR儀有哪些結構組成?

更新時間:2022-09-20      點擊次數:2067
實時熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)也稱 QPCR,是指在DNA 擴增反應中,以熒光化學物質測單次聚合酶鏈式反應(PCR)循環后產物總量的方法。

實時熒光定量PCR主要由樣品載臺、基因擴增熱循環組件、微量熒光檢測光學系統、微電路控制系統、計算機及應用軟件組成。其中基因擴增熱循環組件工作原理與傳統基因擴增儀大致相同,不同廠家不同型號的產品分別采用空氣加熱、壓縮機制冷、半導體加熱制冷等工作方式。微量熒光檢測系統由熒光激發光學部件、微量熒光檢測部件、光路、控制系統組成。

常用的熒光激發方式有兩種:鹵鎢燈和LED;熒光檢測元件常用兩種方式:光電倍增管和冷光CCD攝像機,光單色元件有濾光片和光柵。在實時PCR擴增過程中,熒光信號被收集,轉化為成為擴增和熔解曲線。具體數據就是基線,熒光閾值和Ct值。

CT值: qPCR擴增過程中,擴增產物的熒光信號達到設定的熒光閾值時的所對應的擴增循環數(Cycle Threshold)。
基線:擴增曲線的水平部分(背景信號過高,可獨立設置)
在PCR早期,擴增處于理想情況下,循環數較少,產物積累少,產生熒光的水平不能與熒光本底背景明顯地區別,之后熒光的產生增加進入指數期。
可以在PCR反應剛處于指數期的某一點上來檢測PCR產物的量,以此作為“一定產物量”,并且由此來推斷模板最初的含量。一定產物量對應的熒光信號強度,也就是熒光閾值。
 





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